影音先锋在线观看全资源女优,福利牛在线视频

端?？梢詾榘┘毎O定損傷閾值,超過閾值不能繼續(xù)分裂

發(fā)布時間：2022-09-27 14:18:24作者：輝駿生物-fitgene

端粒代表構(gòu)成染色體末端并受端粒結(jié)合蛋白保護的區(qū)域，這些蛋白質(zhì)保護端粒免于被識別為 DNA 雙鏈斷裂。在體細胞分裂過程中，端粒末端不能通過復制叉的滯后鏈進行復制，導致每個細胞周期后端?？s短。

如果細胞繼續(xù)繁殖，端粒磨損會導致細胞衰老，這種現(xiàn)象可能是腫瘤發(fā)生的障礙。然而，為了實現(xiàn)復制永生，癌細胞克服了端粒縮短。這主要通過激活端粒酶或使用與端粒延長或維持相關的端粒酶非依賴性但基于同源重組的途徑來實現(xiàn)。這種機制被稱為端粒的替代延長（ALT）。

端粒（ALT）癌癥的替代延長

ALT 癌癥通過斷裂誘導復制 (BIR) 途徑重新延長細胞周期 G2 和 M 期的端粒，從而實現(xiàn)永生。以前的研究已經(jīng)闡明了 ALT 機制的毒性。 ALT 端粒高度轉(zhuǎn)錄且富含 RNA：DNA 雜交體（telR 環(huán)）。

易位酶 FANCM 是范可尼貧血 (FA) 腫瘤抑制途徑中高度保守的蛋白質(zhì)，減少和內(nèi)切核糖核酸酶 RNAseH1 的消耗導致 telR 環(huán)、端粒不穩(wěn)定性和 ALT 活性增強。

最近的一項 PNAS 研究假設如果不適當限制 ALT 可能會損害端粒完整性。它證明了抑制端粒重復RNA（TERRA）轉(zhuǎn)錄可以減輕ALT活性。為此，科學家們部署了針對包含特定 CpG 豐富的 29 bp 重復 (T-TALE) 的 TERRA 啟動子的轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應子，并將它們?nèi)诤系睫D(zhuǎn)錄抑制域。

主要發(fā)現(xiàn)

開發(fā)了與核定位信號 (NLS)、RNA 聚合酶 II 轉(zhuǎn)錄激活因子 VP64 和人流感血凝素 (HA) 表位融合的 T-TALE C 末端。科學家克隆了強力霉素（dox）誘導型啟動子下游的轉(zhuǎn)基因，用于開發(fā)兩種獨立的 ALT、U2OS 衍生的克隆細胞系，稱為 vp6 和 vp30。

使用抗 HA 抗體輔助的蛋白質(zhì)印跡來驗證可誘導的轉(zhuǎn)基因表達。用 dox 處理細胞 24 小時，并進行 TERRA qRT-PCR。來自含有 29 bp 的亞端粒的 TERRA 轉(zhuǎn)錄物比未經(jīng)處理的細胞高 3 到 10 倍。然而，來自沒有亞端粒的 29-bp 的 TERRA 保持不變。

與探針的Northern印跡雜交能夠從由所有TERRA分子組成的10q亞端?；颍║UAGGG）n序列中鑒定TERRA，在dox處理后表現(xiàn)出TERRA種類的增加。這一發(fā)現(xiàn)表明該系統(tǒng)可以有效地改善 U2OS 細胞中的 TERRA 轉(zhuǎn)錄。

在端粒處監(jiān)測在絲氨酸 33 (pSer33) 處磷酸化的復制應激標記 (RPA32) 和在絲氨酸 139 (γH2AX) 處磷酸化的 DNA 損傷標記物組蛋白 H2AX 的積累。通過量化 ALT 相關的 PML 小體來監(jiān)測 ALT，并通過 EdU 摻入分析 G2 期端粒 DNA 從頭合成的事件。

未發(fā)現(xiàn) Dox 治療對 TERRA 水平、端粒穩(wěn)定性和 ALT 有效。 DNA 熒光原位雜交 (FISH) 實驗表明，抑制 TERRA 轉(zhuǎn)錄增加了在細胞周期中期沒有可檢測到的端粒 DNA 信號的染色體末端的數(shù)量。本研究中記錄的發(fā)現(xiàn)與之前的一項研究一致，該研究揭示了 TERRA 轉(zhuǎn)錄抑制可以改善 ALT 并促進進行性端?？s短。

觀察到用dox處理9天的vp6和vp30細胞中端粒游離末端（TFE）的積累對nls1細胞沒有任何顯著影響。這一發(fā)現(xiàn)表明，除了復制性縮短之外，端粒丟失機制可以在端粒轉(zhuǎn)錄升高時被激活。

目前的研究表明，dox 處理和與 ALT 端粒相關的結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶 Mus81 增強了 vp6 和 vp30 細胞中端粒 Mus81 病灶的頻率。 Mus81 的消耗導致 nls1 和 vp30 細胞中的 TFEs 增加，這些細胞沒有經(jīng)過 dox 處理。

Mus81 的減少阻止了 dox 處理的 vp30 細胞中 TFE 的積累，而不會避免 TERRA 轉(zhuǎn)錄誘導或 pSer33 和γH2AX 在端粒的積累。這一發(fā)現(xiàn)表明，Mus81 可能在與增強的 TERRA 轉(zhuǎn)錄相關的端粒丟失事件中發(fā)揮重要作用。

結(jié)論

基于當前研究的實驗結(jié)果和其他類似研究的報告，作者提出了一個基于 ALT 的研究模型。該研究提供了證據(jù)并強調(diào)ALT機制與可能危及端粒穩(wěn)定性的分子事件直接相關。因此，必須適當控制 ALT 以允許端粒延長和無限的細胞分裂，而不會過度損失端粒。 TERRA 轉(zhuǎn)錄已被確定為 ALT 癌癥治療的通用靶標。

●熱門推薦●

蛋白組/代謝組實驗

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學

? Label Free 實驗檢測服務 itraq,label free,lc-ms/ms質(zhì)譜鑒定,DIA實驗,廣泛靶向代謝組學